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精氨酸酶是一種水解酶，它催化細(xì)胞內(nèi)的L-精氨酸發(fā)生水解反應(yīng)，生成鳥(niǎo)氨酸和尿素。一般情況下，能產(chǎn)生尿素的人或哺乳動(dòng)物都含有，主要分布于肝臟、腎臟等部位。Fe2+、Co2+、Mn2+等金屬離子能激活精氨酸酶，而Hg+、Ag+、檸檬酸和硼酸等會(huì)讓它失活。精氨酸酶是一種雙核含錳金屬酶，在肝內(nèi)精氨酸酶主要存在于細(xì)胞核和微粒體中。

檢測(cè)樣本中的精氨酸酶活性，一般采用比色法或酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法。

比色法，利用顯色劑，與精氨酸酶反應(yīng)中產(chǎn)生的尿素特異性結(jié)合，產(chǎn)生有色復(fù)合物。這個(gè)顏色的強(qiáng)度與樣品中的精氨酸酶活性成正比，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的方法，計(jì)算含量。

酶聯(lián)免疫吸附法是采用雙抗體夾心的形式。也就是，往預(yù)先包被精氨酸酶（Arg）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的精氨酸酶（Arg）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品活性。

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

操作步驟

1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3. 樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。