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使用液相串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)的方法測(cè)定皂苷的含量,在實(shí)驗(yàn)室科研檢測(cè)過程中,需要掌握過硬的技術(shù),對(duì)方法和設(shè)備要非常熟悉。了解皂苷的物理和化學(xué)性質(zhì),可以在處理樣品的時(shí)候,更有效的提取處理,并不影響到皂苷的種類及含量。還需要了解皂苷的結(jié)構(gòu)和峰的特征,在質(zhì)譜峰的識(shí)別和定量計(jì)算的時(shí)候,要知道哪個(gè)是標(biāo)準(zhǔn)峰,哪個(gè)是樣品峰。參考之前的方法,有時(shí)候根據(jù)樣品的不同,需要進(jìn)行驗(yàn)證。
蘆筍中的皂苷具有多種的生物活性,在植物中的分布很廣,特別是中藥材中。它主要是由皂苷配基和糖,糖醛酸或其他有機(jī)酸組合而成的。皂苷的種類,按配基結(jié)構(gòu)來說,有甾族皂苷,三萜皂苷。
檢測(cè)皂苷含量,一般采用液相質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS/MS)法。
樣品處理:為了能夠更有效的提取出蘆筍中的皂苷,主要采用溶劑提取和超聲波提取。樣品粉碎均勻,過 60 目篩,精確稱取混勻樣品 0.1g左右于20ml棕色離心管中,然后加入10ml 甲醇水提取液(9:1),振蕩混勻 1min。密封后在 60℃水浴中超聲振蕩提取結(jié)束后,轉(zhuǎn)移上清液于 20ml 棕色離心管。重復(fù)提取一次,合并兩次提取液,用甲醇定容至 20ml,振蕩混勻,取適量上清液稀釋 10 倍后上機(jī)測(cè)定。
色譜條件:C18柱,柱溫:40 °C,流速:0.3mL/min,流動(dòng)相組成:A-0.1%甲酸水,B-乙腈。
質(zhì)譜條件:氣簾氣35 arb,碰撞氣7arb,離子噴霧電壓-4500V,正離子模式 ESI- 離子源溫度450 °C,離子源氣體40a,離子源氣體50 arb。
標(biāo)準(zhǔn)曲線,將處理后得到的待測(cè)液,上機(jī)檢測(cè),根據(jù)質(zhì)控實(shí)驗(yàn)來確認(rèn)目標(biāo)峰保留位置,得到峰面積數(shù)據(jù),根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線及樣品稀釋倍數(shù),計(jì)算實(shí)際樣品中的含量。