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類胡蘿卜素含量測定方法
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時間: 2024-07-29 | 349 次瀏覽 | 分享到:

類胡蘿卜素是一類天然色素的總稱,目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的天然類胡蘿卜素有700多種,根據(jù)化學結構不同可以分為胡蘿卜素和葉黃素。類胡蘿卜素廣泛的存在動物、高等植物、真菌、藻類的色素中,而它的顏色是因為共軛雙鍵的數(shù)目不同而有所變化的,共軛雙鍵越多,顏色就越紅。類胡蘿卜素是體內(nèi)維生素A的主要來源,同時還具有抗氧化、免疫調節(jié)、延緩衰老的作用,在一定程度上能夠保護視力。



檢測樣品中的類胡蘿卜素含量的方法有多種,主要包括高效液相色譜(HPLC)法、分光光度法、夾心法酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、液質聯(lián)用(LC-MS)法等。


1. 高效液相色譜法(HPLC)


檢測出樣品中的類胡蘿卜素含量,HPLC是一種經(jīng)濟實惠、高效準確的方法。它利用了色譜柱的分離功能,流動相從色譜柱中將化合物逐步洗脫出來,從而在檢測器中顯示出色譜圖。根據(jù)色譜峰的峰高或峰面積,可以對數(shù)據(jù)進行分析和判斷。使用類胡蘿卜素標準品,梯度稀釋,測定對應的峰面積,繪制標準曲線,計算回歸方程和回收率。在同樣的色譜條件下,對樣品進行測定,記錄色譜峰信息。同時,根據(jù)回歸方程計算出樣品中的類胡蘿卜素含量。這種方法應用范圍廣,比如動物、血清、細胞、植物、細菌、果蔬、土壤、微生物等樣本。



2.分光光度法


這是一種相對簡單的方法,它利用類胡蘿卜素在特定波長下的吸光度,根據(jù)標準曲線來確定樣品中類胡蘿卜素的含量。這種方法只能測量出總胡蘿卜素的含量,準確性相對比較低,適合大批量樣本的檢測。這里需要注意的是,對樣本進行處理。如果樣本處理不準確,結果更不準確了。比如,采用乙醇提取法,通過分光光度計測定。對標準品進行梯度稀釋,并以空白為對照。


3.酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法



這里采用的是夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定方法,將待測的物質和標準品加入到微孔酶標板內(nèi)進行測定。先將待測物質和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再進行溫育和洗滌,去除沒有結合的酶結合物。然后,加入底物A、B,和酶結合物同時作用,產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質的濃度是呈線性關系的,通過對標準品進行梯度稀釋,在酶標儀特定的波長下測定吸光度值。根據(jù)對應的濃度關系,制作標準曲線。并根據(jù)標準曲線,可以計算出樣品中的類胡蘿卜素的含量。


4.液質聯(lián)用(LC-MS)法


LC-MS集合了液相色譜的分離和質譜高分辨的優(yōu)點,準確度更高,能夠同時實現(xiàn)類胡蘿卜素的定性和定量分析。這種方法,能夠精確測定和判斷分子結構和含量,但需要有專業(yè)的技術和設備來完成。


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