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高效液相色譜檢測犬尿氨酸含量
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時間: 2024-07-23 | 180 次瀏覽 | 分享到:

犬尿氨酸是色氨酸的代謝中間產(chǎn)物,可用于生產(chǎn)煙酸。犬尿氨酸是色氨酸在人體內(nèi)的一種代謝途徑,主要是由吲哚胺2,3-雙加氧酶和肝臟色氨酸2,3-雙加氧酶催化色氨酸生成犬尿氨酸。犬尿氨酸生成后,還可以進一步代謝為犬尿喹啉酸和喹啉酸。這些代謝產(chǎn)物,通過不同的機制作用于N-甲基-D-天冬氨酸受體,參與神經(jīng)調(diào)節(jié),影響認知過程。如果體內(nèi)的犬尿氨酸代謝紊亂,很可能出現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的疾病,比如抑郁等癥狀。



犬尿氨酸檢測方法主要包括高效液相色譜(HPLC)法、氣相色譜(GC)法、質(zhì)譜(MS)法等。其中,高效液相色譜(HPLC)法是最常用的方法之一。


高效液相色譜(HPLC)檢測犬尿氨酸的過程主要包括以下幾個步驟:


一、實驗材料與方法


實驗需要有犬尿氨酸的標準品,用來做標準曲線或內(nèi)標測定。當然,高效液相色譜儀是肯定需要的。對于耗材型號的選擇,是非常關鍵的,因為每個參數(shù)都可能影響到檢測效果。配制溶液的試劑需要正規(guī)的廠家,匹配對應的純度才行,比如甲醇、乙腈、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、甲酸銨、乙酸銨等。另外,色譜柱是選擇C18的用于分離,流動相以甲醇-水,流速為1.0mL/min,檢測器波長254nm。還需要考慮柱溫和進樣量等。



對于方法,其實包括了檢測操作步驟。將犬尿氨酸標準品用甲醇溶解,制備成1mg/ml的標準溶液。將標準溶液進樣測定色譜峰值,計算回收率。同時,要對樣品進行處理。加入甲醇進行沉淀,離心后取上清液,用磷酸鹽緩沖液進行稀釋。


二、檢測過程


在檢測的過程中,將標準品和樣品注入到HPLC中。在色譜柱中,樣品中的不同組分在固定相中分配系數(shù)不同而分離,再在流動相以一定的速率條件下洗脫出來。在檢測波長下,記錄色譜圖中各峰的保留時間和峰面積。


三、數(shù)據(jù)處理


根據(jù)色譜圖,識別出犬尿氨酸的保留時間。根據(jù)峰面積,通過標準曲線法或內(nèi)標法計算出犬尿氨酸的濃度。


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