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桑葚中花青素含量檢測(cè)方法
來(lái)源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時(shí)間: 2024-07-22 | 179 次瀏覽 | 分享到:

花青素是一類廣泛存在于開(kāi)花植物中的水溶性天然色素,是花色苷水解而得到的一種有色苷元,在水果、蔬菜、花卉等都呈色。在植物細(xì)胞液中,pH不同,花色素能夠讓花瓣呈現(xiàn)五顏六色?;ㄇ嗨赜?0多種,比如天竺葵色素、矢車菊色素、飛燕草色素、芍藥色素等。自然狀態(tài)的花青素是以糖苷的形式存在,稱為花色苷,很少有游離的花青素存在?;ㄇ嗨卦谥参锏捏w內(nèi),隨著季節(jié)的變化而發(fā)生改變。在27個(gè)科、73個(gè)種屬的植物中都含有花青素,比如紫甘薯、葡萄、藍(lán)莓、櫻桃、桑葚、牽牛花等。



檢測(cè)桑葚中的花青素含量,方法還是挺多的。比如分光光度法、高效液相色譜(HPLC)法、液相質(zhì)譜(LC-MS)法、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法等。


1.分光光度法


花青素在特定的波長(zhǎng)下具有強(qiáng)的吸光特點(diǎn),通過(guò)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋,測(cè)定對(duì)應(yīng)的吸光度值,并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時(shí),對(duì)樣品進(jìn)行處理,并在特定的波長(zhǎng)(513nm)下測(cè)定吸光度,可以重復(fù)幾次求取平均值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,可以計(jì)算出樣品中的花青素含量。這種方法較為簡(jiǎn)單,適合測(cè)定樣品中的花青素總的含量。使用到紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì),考驗(yàn)的是實(shí)驗(yàn)的基本功。



2.高效液相色譜(HPLC)法


使用HPLC測(cè)植物色素,是相對(duì)常見(jiàn)的方法。它利用了色譜柱的分離,并在流動(dòng)相的洗脫作用下,逐步展示在色譜峰上。根據(jù)花青素在色譜柱中的分配位置不同,在前面的就會(huì)早洗脫出來(lái),而后面的會(huì)晚洗脫出來(lái)。當(dāng)花青素被分離出來(lái)的時(shí)候,流動(dòng)相中的有機(jī)溶劑比例梯度增加,可以通過(guò)特定波長(zhǎng)下的檢測(cè)器,進(jìn)行定量分析。因?yàn)榛ㄇ嗨卦诹鲃?dòng)相的沖洗作用下,不是一下子全部出來(lái)的,而是逐步的從低到高再到低的濃度,對(duì)色譜峰面積為定量分析。還要通過(guò)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰的定量分析,計(jì)算出回收率,才能還原出樣品中相對(duì)準(zhǔn)確的花青素含量。



3.液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)法


LC-MS是結(jié)合了高效液相色譜法的高分離和質(zhì)譜儀的高分辨、高靈敏度檢測(cè)功能,對(duì)樣品中的花青素進(jìn)行定性定量分析。前面的液相部分就不說(shuō)了,主要是后面的質(zhì)譜分析。將花青素進(jìn)行離子化,碎片離子在電場(chǎng)和磁場(chǎng)的作用下,按荷質(zhì)比的不同進(jìn)行分配,確定花青素的分子結(jié)構(gòu)和含量。對(duì)于復(fù)雜的,低濃度的花青素分析,這種方法是比較有用的。


4.酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法


基于抗體-抗原反應(yīng)的特點(diǎn),對(duì)樣品中的花青素進(jìn)行測(cè)定。也是要使用標(biāo)準(zhǔn)品,梯度稀釋并做標(biāo)準(zhǔn)曲線。這種方法具有高靈敏度和高選擇性,一般是用elisa試劑盒的形式,按說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行操作。


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