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脯氨酸含量測定方法
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時間: 2024-07-19 | 429 次瀏覽 | 分享到:

脯氨酸是一種環(huán)形的亞氨基酸,化學式為C5H9NO2,分子量為115.13,等電點為6.30,易溶于水。當脯氨酸進入肽鏈,就會形成4-羥脯氨酸,是動物膠原蛋白的重要成分。當植物在干旱、高溫、低溫、鹽堿等逆境條件下,羥脯氨酸含量會明顯提升,說明脯氨酸和植物逆境的適應(yīng)性有關(guān)。這也是檢測脯氨酸的重要意義,可以判斷植物的生長規(guī)律和適應(yīng)性。另外,脯氨酸是人體的非必需氨基酸。上面我們首先提到的物理和化學特性,是很有必要的。在檢測脯氨酸含量的時候,就是要利用它的物理或化學特點,才能判斷并測定出來。比如,在質(zhì)譜定性定量分析的時候,要用到它的分子量。



檢測樣品中脯氨酸的含量,主要方法包括茚三酮顯色法、水楊酸比色法、苯酰亞胺法、液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)法等。


分光光度法:


這種方法是利用化學試劑和脯氨酸在酸性條件下發(fā)生反應(yīng),生成具有明顯顏色變化的物質(zhì),而且這個物質(zhì)在一定時間內(nèi)是穩(wěn)定的,可以被分光光度計在特定的波長下測定,并記錄數(shù)據(jù)。對標準品進行梯度稀釋,并依次測定對應(yīng)的吸光度值。根據(jù)吸光度值和濃度之間的關(guān)系,制作出標準曲線。對樣品進行處理,并在同樣的條件下測定吸光度值,重復(fù)幾次,求取平均值。結(jié)合標準曲線和樣品的測定值,可以計算出樣品中的脯氨酸含量。常用的方法有茚三酮顯色法、水楊酸法、苯酰亞胺法等。



LC-MS法:



LCMS可以測定樣品中含量較低的脯氨酸,利用了HPLC的高效分離和質(zhì)譜的高靈敏度,對樣品碎片離子進行荷質(zhì)比分析,進而對脯氨酸進行定性和定量檢測。對樣品處理,需要利用乙酸酐等試劑對脯氨酸進行衍生化處理。設(shè)置好質(zhì)譜儀的電離源、分析模式、質(zhì)譜分析范圍等條件,調(diào)節(jié)實驗參數(shù),分析荷質(zhì)比。


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