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L-蘋(píng)果酸是一種天然存在的有機(jī)酸，化學(xué)式為C4H6O5。在自然界中的水果中比較多，比如蘋(píng)果，葡萄，櫻桃等。L型是蘋(píng)果酸的一種立體異構(gòu)體，是一種手性結(jié)構(gòu)，具有特定的旋光性。L-蘋(píng)果酸溶于水和乙醇，是一種酸性較強(qiáng)的有機(jī)酸?？梢宰鳛槭称氛{(diào)節(jié)劑或酸味劑，用于食品工業(yè)，醫(yī)藥工業(yè)，日用化工等領(lǐng)域。從目前的科學(xué)研究情況來(lái)看，L-蘋(píng)果酸被認(rèn)為是一種安全，無(wú)毒，無(wú)害的有機(jī)酸。

使用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)L-蘋(píng)果酸的含量，需要經(jīng)過(guò)一系列的步驟。包括樣品的前處理，hplc色譜參數(shù)設(shè)置，色譜峰和數(shù)據(jù)處理，標(biāo)準(zhǔn)曲線，含量計(jì)算等。

1.前處理

將植物樣品進(jìn)行粉碎，磨成粉，過(guò)篩。精確稱取4g，放置在15mL的離心管中，加入5mL的水，4℃超聲提取30min。放在4℃的冰箱靜置2h，取4000r/min離心10min，重復(fù)上述的操作兩次，用水定容到10mL，混勻，過(guò)濾膜。

2.色譜條件

采用常規(guī)的C18色譜柱，5um，250*4.6mm，柱溫30℃。VWD檢測(cè)器，波長(zhǎng)210nm。0.1%磷酸水和甲醇為流動(dòng)相，等度洗脫，流速為1ml/min。進(jìn)樣量為10-20ul，僅供參考。

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線

這是一種外標(biāo)法，使用L-蘋(píng)果酸的標(biāo)準(zhǔn)品，進(jìn)行溶解和定容，并記錄溶液濃度。此時(shí)，需要對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行梯度，成倍的稀釋?zhuān)辽?個(gè)濃度點(diǎn)。稀釋的濃度點(diǎn)，要覆蓋在檢測(cè)器有效的范圍內(nèi)。根據(jù)測(cè)定出來(lái)的色譜峰，對(duì)峰面積進(jìn)行積分。對(duì)應(yīng)到標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，可以繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程，相關(guān)系數(shù)r2＞0.999。

4.樣品測(cè)定

有時(shí)候，為了確保樣品檢測(cè)的準(zhǔn)確性，也有先測(cè)樣品，后測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的。在上述的色譜條件下，測(cè)定樣品，看出峰情況。對(duì)色譜峰面積進(jìn)行積分，可以用自動(dòng)的，也有手動(dòng)的。使用標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，可以計(jì)算出樣品中L-蘋(píng)果酸的含量。為了確保準(zhǔn)確性，要考慮穩(wěn)定性，回收率等。