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苦杏仁酸,主要是從苦杏仁中提取出來(lái)的,也稱(chēng)為扁桃酸。屬于脂溶性的有機(jī)酸,化學(xué)式為C8H8O3,分子量152.15,易溶于熱水,乙醚,異丙醇和乙醇。也可以通過(guò)人工合成的方法制備,比如苯乙酮法,苯乙醛酸法,苯甲醛轉(zhuǎn)移法等??嘈尤仕崮艽龠M(jìn)新陳代謝,補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng),改善皮膚。在醫(yī)藥工業(yè)上,可以用于制造醫(yī)藥中間體。
檢測(cè)苦杏仁酸的方法有很多,實(shí)驗(yàn)室法有高效液相色譜(HPLC)法、氣相色譜(GC)法、質(zhì)譜(MS)法、薄層色譜法、分光光度法,酶聯(lián)免疫吸附法等。
1.氣相色譜(GC)法
氣相色譜,測(cè)苦杏仁酸含量。需要先將樣品處理,主要包括提取,純化等步驟。剩下的就是氣相部分,它包括色譜柱,流動(dòng)相,色譜柱。一般情況下,測(cè)苦杏仁酸,用氫火焰離子檢測(cè)器(FID),使用聚乙二醇(PEG)或甲基硅氧烷為色譜柱的固定相。硬件部分是這些,更重要是操作參數(shù)的變化。包括柱溫,載氣流量,進(jìn)樣量,檢測(cè)器參數(shù)等。為了更準(zhǔn)確的檢測(cè),有的地方會(huì)采用GC-MS聯(lián)用的形式,從而獲得更準(zhǔn)確的含量。
2.高效液相色譜(HPLC)法
前處理:用甲醇或乙腈為溶劑,混合后,超聲波溶解,離心提取。過(guò)程是這樣的,操作需要按照規(guī)定的參數(shù)進(jìn)行。
色譜條件:C18色譜柱,柱溫室溫;乙腈,水和醋酸為流動(dòng)相,流速1.0ml/min;紫外檢測(cè)器,波長(zhǎng)220nm。也有用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器,熒光檢測(cè)器。進(jìn)樣量10ul,僅供參考。一般有標(biāo)準(zhǔn)的方法,也有自己開(kāi)發(fā)的。在使用之前,是需要驗(yàn)證的,獲得準(zhǔn)確的檢測(cè)效果。
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):有用內(nèi)標(biāo)法的,也有用外標(biāo)的,即標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的方法。
質(zhì)譜法,一般是和高效液相色譜(HPLC)聯(lián)用的,通過(guò)測(cè)定質(zhì)譜峰,定量計(jì)算出含量。
3.酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法
該檢測(cè)方法采用雙抗體夾心法來(lái)測(cè)定標(biāo)本中苦杏仁酸的含量。使用純化的苦杏仁酸捕獲抗體包被微孔板,形成固相抗體。然后,向包被的微孔中加入待測(cè)樣本,樣本中的苦杏仁酸會(huì)與固相抗體結(jié)合。接著,加入HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。通過(guò)徹底洗滌后,加入底物TMB進(jìn)行顯色反應(yīng)。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物,在酸的作用下最終變成黃色,顏色的深淺與樣品中苦杏仁酸的濃度有相關(guān)。最后,使用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中苦杏仁酸的含量。