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異槲皮苷含量檢測(cè)方法
來(lái)源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時(shí)間: 2024-07-26 | 238 次瀏覽 | 分享到:

異槲皮苷又稱羅布麻甲素,槲皮素-3-O-葡萄糖苷,屬于黃酮類化合物。主要存在于砂仁、桑葉、羅布麻、田基黃、辣木葉、鬼針草、青錢柳葉等多種藥用植物中,異槲皮苷具有許多的藥理作用,比如鎮(zhèn)靜、降血壓等。異槲皮苷具有活性氧自由基和抗氧化作用,活性氧自由基在生物體內(nèi)參與氧代謝,具有很高的反應(yīng)活性,能清除體內(nèi)多余的自由基。



檢測(cè)樣品中異槲皮苷含量,常用的方法包括高效液相色譜(HPLC)法。這是一種高靈敏度的方法,它重現(xiàn)性好,穩(wěn)定性強(qiáng),檢測(cè)效率高,色譜分析準(zhǔn)確。下面呢,我們就稍微提一下HPLC檢測(cè)方法。


準(zhǔn)備:這里需要確認(rèn)的是HPLC的設(shè)備和系統(tǒng)運(yùn)行,配備必要的色譜柱,比如C18的柱子,紫外檢測(cè)器。對(duì)于流動(dòng)相,要選擇對(duì)應(yīng)純度的試劑,比如甲醇、乙腈等。異槲皮素對(duì)照品肯定是需要的,在做標(biāo)準(zhǔn)曲線的時(shí)候,需要對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行梯度稀釋,并進(jìn)樣檢測(cè)色譜峰,通過峰面積對(duì)濃度進(jìn)行對(duì)照,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算回歸方程。



樣品處理:精密稱量適當(dāng)重量的異槲皮素樣品和對(duì)照品,用50%甲醇分別制成20ug/mL的溶液。


色譜條件:準(zhǔn)備了以上的設(shè)備和溶劑,就要進(jìn)行最優(yōu)化的設(shè)計(jì)組合。也就是將色譜柱、流動(dòng)相、流速、柱溫、檢測(cè)波長(zhǎng)、進(jìn)樣量等參數(shù),組合起來(lái)能夠達(dá)到最佳的色譜分析效果的條件。比如,A-0.1%甲酸水與B-乙腈的混合液,通過梯度洗脫或等度洗脫方式進(jìn)行;流速1ml/min,柱溫30℃,紫外波長(zhǎng)354nm,進(jìn)樣量20ul。


檢測(cè)和分析:


在設(shè)定的色譜條件下,異槲皮素和其他化合物在色譜柱上得到分離,并在流動(dòng)相作用下洗脫出來(lái),通過檢測(cè)器獲取信號(hào),模擬成色譜圖和數(shù)據(jù)。根據(jù)色譜圖上的峰面積或峰高,結(jié)合對(duì)照品的濃度,也就是回收率,可以計(jì)算出樣品中的異槲皮素含量。


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