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丁酸含量檢測(cè)方法
來(lái)源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時(shí)間: 2024-07-18 | 631 次瀏覽 | 分享到:

丁酸是直鏈飽和脂肪酸,也是短鏈脂肪酸,化學(xué)式為CH3(CH2)2COOH,分子量:88.11,能夠溶于水、乙醇和乙醚等。天然的丁酸存在與香茅、肉豆蔻、奶油等中,可以做食用香料、水果香精,也可以作為萃取劑,用于制備丁酸脂類化合物。丁酸可以發(fā)生脫水、酯化、α-H、脫羧等反應(yīng)。在動(dòng)物脂肪和植物油中以丁酸酯形式存在,在工業(yè)上用蔗糖或淀粉發(fā)酵的形式來(lái)獲取丁酸。



檢測(cè)樣本中的丁酸含量,方法還是比較多的。通常情況下,采用的是高效液相色譜(HPLC)法、氣相色譜(GC)法、液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)法、氣質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)法、比色法等。方法雖多,但道理是一樣的。這里我們簡(jiǎn)單的介紹一下,根據(jù)需求來(lái)選擇對(duì)應(yīng)的方法。


1.高效液相色譜(HPLC)法


從樣本溶液中將丁酸分離出來(lái),這主要靠色譜柱和流動(dòng)相。選擇適當(dāng)?shù)纳V柱,可以讓混合物中的丁酸和其他物質(zhì)分離開(kāi)來(lái),這里用一般的C18色譜柱。流動(dòng)相的話,就是將色譜柱上的丁酸,沖洗出來(lái)并進(jìn)入檢測(cè)器獲取對(duì)應(yīng)的信號(hào),從而轉(zhuǎn)化成有效的圖譜和數(shù)據(jù)。因此,流動(dòng)相就要盡可能的將丁酸洗脫出來(lái),這里用的是甲醇-水混合溶劑。在色譜條件設(shè)置的時(shí)候,還有很多其他因素和參數(shù)影響到檢測(cè)結(jié)果,比如柱溫、進(jìn)樣量、流速、檢測(cè)器等。



選擇最佳的色譜條件,其實(shí)并不是容易得事情。如果有現(xiàn)成的方法或標(biāo)準(zhǔn),那就直接操作就行了。如果要對(duì)方法開(kāi)發(fā),那就要最優(yōu)化設(shè)計(jì),從而確保能夠最大程度上檢測(cè)出結(jié)果。說(shuō)來(lái)話長(zhǎng)了,這里先說(shuō)檢測(cè)步驟吧。樣品的準(zhǔn)備是不可忽略的,如果樣品處理不恰當(dāng),結(jié)果會(huì)出現(xiàn)較大的偏差的。因此,這個(gè)前期處理是需要認(rèn)真核對(duì),去除雜質(zhì),粉碎成末,并加入適當(dāng)?shù)娜軇┹腿?。接著要繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品實(shí)現(xiàn)梯度稀釋,并進(jìn)樣到色譜系統(tǒng),測(cè)定它們的峰面積并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。接著,將待測(cè)樣品注入到液相色譜,測(cè)定色譜峰高和峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中丁酸含量。需要測(cè)重復(fù)性,穩(wěn)定性,回收率等。也可以先測(cè)樣品,再測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品,避免出現(xiàn)色譜柱被標(biāo)準(zhǔn)品污染的情況。


2.氣相色譜(GC)法


氣相色譜是利用惰性氣體為流動(dòng)相,以色譜柱來(lái)分離混合物中的丁酸,通過(guò)檢測(cè)器來(lái)獲取信號(hào)并讀取數(shù)據(jù)。就是通過(guò)加熱的方法,將溫度升高到丁酸的沸點(diǎn)左右,跟著氣體一起進(jìn)入到檢測(cè)器。樣本的準(zhǔn)備,和HPLC是相似的。色譜柱和條件的選擇是不同的,色譜柱是用毛細(xì)管色譜柱,以氮?dú)鉃檩d氣,流速為1.0mL/min。準(zhǔn)備不同濃度的丁酸標(biāo)準(zhǔn)溶液,并進(jìn)樣檢測(cè),根據(jù)色譜檢測(cè)數(shù)據(jù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè),記錄色譜圖和數(shù)據(jù),并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算樣品中含有的丁酸含量。



此外,還有LC-MS和GC-MS檢測(cè)法,這兩種方法搭載了高靈敏度的質(zhì)譜檢測(cè)器,更深入、更準(zhǔn)確對(duì)丁酸進(jìn)行定性和定量分析。不過(guò),檢測(cè)精度越高,成本也相應(yīng)增加了。隨著科技的發(fā)展,也可以采用試劑盒的方法測(cè)定。


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