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粗多糖,其實是一種復(fù)合型的雜多糖,主要有粘多糖、脂多糖、結(jié)合多糖等。有利于促進(jìn)雙歧桿菌的增值、抑制病原菌、增強(qiáng)免疫力等作用。檢測樣品中的粗多糖含量,這里推薦的一種方法是比色法。
檢測原理:多糖在濃硫酸的作用下,可以水解為單糖,并迅速脫水生成糠醛衍生物。衍生物和苯酚縮合形成橙黃色化合物。在一定的濃度范圍內(nèi),其顏色的深淺和糖的含量是呈線性關(guān)系的。通過比色法測定吸光度值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,可以計算出粗多糖的含量。以下方法,僅供參考;如需檢測,按標(biāo)準(zhǔn)操作流程進(jìn)行。
1.樣品處理
先提取,稱取5g樣品,加入100ml蒸餾水,沸水浴保持2h,冷卻到室溫,定容到200ml,混勻后過濾,丟棄過濾液,收集余下的濾液。吸取以上的濾液100ml,放到燒杯中,加熱濃縮到10ml,冷卻后,加入無水乙醇40ml,在3000rpm離心5min,丟棄上清液,剩下殘渣。將殘渣用水溶解,定容到50ml,混勻過濾。取濾液2ml,加入氫氧化鈉2.0ml,Cu溶液2.0ml,沸水浴2min,冷卻后3000rpm離心5min,棄上清,剩殘渣。將上述殘渣用2.0ml硫酸溶解,定容到100ml。吸取2.0ml,放置在25ml比色管中,加入1.0ml苯酚,10ml濃硫酸,沸水浴2min,冷卻比色。
2.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
這里說的不是怎么繪制,而且實驗過程??梢杂闷暇厶腔蚱咸烟亲鳛闃?biāo)準(zhǔn)品,依次進(jìn)行梯度稀釋。比如分別吸取0、0.2mL、0.4ml、0. 6ml、 0. 8mL 、1.0ml,標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖工作液于 20mL 的比色管,各補水1mL,然后,迅速各加入 5% 苯酚溶液 1.0ml,靜置10min 后,用漩渦振蕩器使反應(yīng)液充分搖勻,30度 熱水浴中反應(yīng) 20min,室溫下在 485nm 處,以試劑空白溶液為參比,分別測其吸光度。
3.結(jié)果計算
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,可以計算出樣品中的粗多糖含量。