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水飛薊素是一種天然的黃酮木質(zhì)素類化合物,它源于菊科植物水飛薊。將水飛薊的果實(shí)經(jīng)過干燥,可以提取出來天然的活性物質(zhì),包括水飛薊賓、水飛薊寧、水飛薊亭等。水飛薊素是難溶于水的,但是可以輕松的溶解到丙酮、乙酸乙酯、甲酸乙醇等有機(jī)溶劑。水飛薊素對(duì)肝細(xì)胞膜有穩(wěn)定作用,避免某些對(duì)肝有毒性作用的物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部,同時(shí)它能夠幫助細(xì)胞結(jié)構(gòu)和蛋白酶的大量合成,有助于肝細(xì)胞的修復(fù)和再生。研究水飛薊素,還是有比較大的科研價(jià)值的。
檢測(cè)樣品中的水飛薊素的方法,還是有很多種的。其中比較常見的有分光光度法、高效液相色譜(HPLC)法、氣相色譜(GC)法等。下面呢,簡(jiǎn)單的做一個(gè)介紹。如果要做實(shí)驗(yàn),可以參考詳細(xì)的操作規(guī)程或步驟。
1.分光光度法
這種方法相對(duì)比較簡(jiǎn)單,它是利用2,4-二硝基苯肼試劑和水飛薊素發(fā)生化學(xué)反應(yīng),生成有顏色的化合物。這個(gè)產(chǎn)物的顏色和水飛薊素的含量是呈一定的線性關(guān)系,為什么有這樣的結(jié)論呢,是通過標(biāo)準(zhǔn)品的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)獲得的,以有限次的實(shí)驗(yàn)來推演理想化的線性。同時(shí),以線性關(guān)系來反過來計(jì)算樣品中的化合物含量。打開分光光度計(jì),選擇特定的波長(zhǎng),這個(gè)波長(zhǎng)可以通過一系列的波長(zhǎng)檢測(cè)同樣的標(biāo)準(zhǔn)品,獲得最大吸光度來確定。整個(gè)檢測(cè)過程,包括試劑和設(shè)備的準(zhǔn)備,樣品的制備,標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作,檢測(cè)結(jié)果的計(jì)算和分析等。
2.高效液相色譜(HPLC)法
在分析實(shí)驗(yàn)室,HPLC是常用的一種檢測(cè)儀器。對(duì)樣品進(jìn)行處理,在色譜柱中分離出水飛薊素,通過流動(dòng)相逐步的展示出來,最后在檢測(cè)器的作用下獲得對(duì)應(yīng)的信號(hào),通過模擬信號(hào)轉(zhuǎn)化為檢測(cè)數(shù)據(jù)。要知道的是,設(shè)備是固定的,但也是靈活的。選擇理想的檢測(cè)條件,是對(duì)方法的驗(yàn)證。如果方法不熟悉,肯定無法完成的。有了方法,也就是能夠熟悉檢測(cè)過程中的條件和要求,比如采用什么樣的色譜柱,流動(dòng)相的配比,柱溫,進(jìn)樣量,進(jìn)樣速率,檢測(cè)器類型,檢測(cè)波長(zhǎng)等。每個(gè)條件都可能影響到最終的檢測(cè)數(shù)據(jù)和結(jié)果,就要通過不同條件的對(duì)比,實(shí)現(xiàn)最優(yōu)化的組合。如果是一種新的方法,看起來是比較麻煩的。但對(duì)于成熟的方法,是直接拿來用的,能夠快速獲得高靈敏、高準(zhǔn)確度的數(shù)據(jù)。通過對(duì)色譜峰高和峰面積的分析,計(jì)算出樣品中的水飛薊素含量。
除了以上的分光光度法和HPLC法,還有就是氣相色譜法。測(cè)定水飛薊提取物中的有機(jī)溶劑殘留量,如己烷、乙醇和丙酮。這種方法通過測(cè)定色譜峰面積來進(jìn)行定量分析。