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吡哆醇是一種有機(jī)物，也稱為維生素B6?；瘜W(xué)式為C8H11O3N，分子量169.18，能溶于水和乙醇。它能參與多種生物化學(xué)反應(yīng)，比如，氨基酸的代謝，脂肪的代謝等。吡哆醇廣泛的存在米糠，蔬菜，蜜糖等食物中，是一種水溶性的維生素。它在生物體內(nèi)會(huì)轉(zhuǎn)變?yōu)檫炼呷?，吡哆醛又?huì)變成吡哆胺。吡哆醇和蛋白代謝也是有關(guān)系的，如果在蛋白代謝過程中沒有了吡哆醇，蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)樘妓衔锖椭镜耐肪蜁?huì)堵塞。另外，吡哆醇對(duì)血紅蛋白的合成也是必需的。

檢測方法有多種，常見的有高效液相色譜（HPLC）法，酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法。

1.HPLC

將植物的樣品打碎，研磨，過篩。稱取一定量到試管中，加入甲醇，水和磷酸混合溶液，超聲，離心，過濾。這個(gè)過程，是對(duì)樣品進(jìn)行前處理。提取的大致流程是相似的，根據(jù)每個(gè)樣品的特點(diǎn)不同，會(huì)有不同的方法，參數(shù)會(huì)變化的。

色譜條件，是比較關(guān)鍵的。我們通常來說，就是方法開發(fā)。HPLC測的過程中，針對(duì)不同的物質(zhì)，分離和檢測的參數(shù)都不一樣。結(jié)合的是什么，化合物基礎(chǔ)的物理和化學(xué)特性。比如，吡哆醇檢測，采用C18的色譜柱，柱溫為室溫。這里是的室溫，并不是隨便的室溫，根據(jù)實(shí)際情況可以調(diào)整的。0.04%戊烷磺酸鈉溶液和甲醇為流動(dòng)相，流速為1.0ml/min。紫外檢測器，波長為280-290nm，需要進(jìn)行驗(yàn)證。一般的進(jìn)樣量為10-20uL，根據(jù)出峰情況進(jìn)行調(diào)整，確保能夠獲得有效的色譜峰。

大多數(shù)科研檢測，會(huì)采用外標(biāo)法，也就是標(biāo)準(zhǔn)曲線來計(jì)算含量。也就是對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行溶解，成倍的稀釋5-7個(gè)濃度點(diǎn)。這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度點(diǎn)是已知的，使用有效的色譜條件，測定出它們的色譜峰。對(duì)峰面積進(jìn)行積分處理，可以手動(dòng)，也可以自動(dòng)。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，描點(diǎn)繪制曲線。回歸方程，相關(guān)系數(shù)R2＞0.999。稀釋5-7個(gè)點(diǎn)，并不是隨意的，最低點(diǎn)一般是檢出限的5倍左右，

因?yàn)闃悠愤M(jìn)樣到HPLC，也會(huì)有色譜峰。條件是相同的，出來的色譜峰積分后，使用面積和回歸方程，就能計(jì)算出樣品中吡哆醇的含量。這個(gè)過程，還要考慮到樣品的稀釋倍數(shù)。

2.酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法

通過酶標(biāo)記的抗體與維生素B6結(jié)合，形成酶標(biāo)-抗體-維生素B6復(fù)合物，然后加入底物使酶催化底物發(fā)生顏色反應(yīng)，通過測定顏色反應(yīng)的強(qiáng)度來推算維生素B6的含量。

檢測過程：樣品處理-包被抗體-洗滌-封閉，溫育-加入標(biāo)準(zhǔn)品和樣品-加入檢測抗體-加入底物-反應(yīng)終止-數(shù)據(jù)分析。